স্পেকট্রোফটোমিটার ব্যবহার করে ডিএনএ ঘনত্ব কীভাবে গণনা করা হয়?

2024 লেখক: Miles Stephen | [email protected]. সর্বশেষ পরিবর্তিত: 2023-12-15 23:34

ডিএনএ ঘনত্ব হয় দ্বারা অনুমান করা হয় 260nm এ শোষণ পরিমাপ করা, A সামঞ্জস্য করা₂₆₀ অস্বচ্ছতার জন্য পরিমাপ ( দ্বারা মাপা 320nm এ শোষণ), গুন করা দ্বারা dilution ফ্যাক্টর, এবং ব্যবহার সম্পর্ক যে একটি A₂₆₀ 1.0 = 50µg/ml বিশুদ্ধ dsDNA।

লোকেরা আরও জিজ্ঞাসা করে, আপনি কীভাবে ডিএনএর ঘনত্ব এবং বিশুদ্ধতা খুঁজে পান?

মূল্যায়নের ডিএনএ বিশুদ্ধতা , অন্যান্য সম্ভাব্য দূষক সনাক্ত করতে 230nm থেকে 320nm পর্যন্ত শোষণ পরিমাপ করুন। সবচেয়ে সাধারণ বিশুদ্ধতা গণনা 260nm-এ শোষণের অনুপাতকে 280nm-এ রিডিং দিয়ে ভাগ করা হয়। ভাল মানের ডিএনএ একটি A থাকবে₂₆₀/এ₂₈₀ অনুপাত 1.7-2.0।

একইভাবে, একটি ভাল ডিএনএ ঘনত্ব কি? ক ভাল গুণমান ডিএনএ নমুনায় A থাকা উচিত₂₆₀/এ₂₈₀ অনুপাত 1.7-2.0 এবং একটি A₂₆₀/এ₂₃₀ অনুপাত 1.5-এর বেশি, কিন্তু যেহেতু এই দূষকগুলির প্রতি বিভিন্ন কৌশলের সংবেদনশীলতা পরিবর্তিত হয়, তাই এই মানগুলি শুধুমাত্র আপনার নমুনার বিশুদ্ধতার নির্দেশিকা হিসাবে নেওয়া উচিত।

এই বিষয়ে, ন্যানোড্রপ কীভাবে ডিএনএ ঘনত্ব গণনা করে?

আপনি 260 nm এ শোষণের মানকে একটি নির্দিষ্ট ফ্যাক্টর দ্বারা গুণ করেন (এটি 50 এর জন্য ডিএনএ ) এবং আপনি পাবেন ডিএনএ ঘনত্ব . ভয়লা (ঠিক আছে এটি প্রযুক্তিগতভাবে একটি 10-মিমি পুরু নমুনার A260 যা 50 দ্বারা গুণিত হয়; ন্যানোড্রপ A260 প্রকাশ করে যেন নমুনাটি 10 মিমি পুরু, যেমন একটি স্ট্যান্ডার্ড কুভেটের মতো)।

কেন আমাদের ডিএনএ পরিমাপ করতে একটি স্পেকট্রোফটোমিটার ব্যবহার করতে হবে?

ক স্পেকট্রোফটোমিটার হল নিউক্লিক অ্যাসিডের গড় ঘনত্ব নির্ধারণ করতে সক্ষম ডিএনএ বা RNA একটি মিশ্রণে উপস্থিত, সেইসাথে তাদের বিশুদ্ধতা। ব্যবহার বিয়ার-ল্যামবার্ট আইন হয় শোষক অণুর ঘনত্বের সাথে শোষিত আলোর পরিমাণ সম্পর্কিত করা সম্ভব।